根據(jù)“廣東省科學技術(shù)廳關(guān)于2015年度廣東省科學技術(shù)獎推薦工作的通知”的要求，現(xiàn)將生物院擬申報項目《豬基因突變技術(shù)創(chuàng)新及基因修飾豬模型的建立》的主要完成單位、主要完成人、項目簡介、代表性論文目錄予以公示。若對完成單位、完成人及項目有異議，可在2015年6月29日-7月5日以書面形式送交科研教育處。異議應當簽署真實姓名或加蓋單位公章，并注明聯(lián)系方式，否則不予受理。  

　　聯(lián)系人：潘光錦　 黃洲萍  

　　聯(lián)系電話：020-32015213　 020-32093465  

　　傳真：020-32015229  

　　地址：廣州市科學城開源大道190號  

　　附件：項目名稱、主要完成單位、主要完成人、項目簡介及代表性論文目錄 

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院  

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　二○一五年六月二十九日  

　　附件：項目名稱、主要完成單位、主要完成人、項目簡介及代表性論文目錄 

　　項目名稱：豬基因突變技術(shù)創(chuàng)新及基因修飾豬模型的建立 

　　主要完成單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，南方醫(yī)科大學，浙江大學，深圳華大基因研究院 

　　主要完成人： 

　　賴良學，第一完成人，職稱：研究員，工作單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，完成單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，主要貢獻：團隊負責人，負責項目方向的整體規(guī)劃和設(shè)計。是5項科學發(fā)現(xiàn)的主要完成人，是5篇代表性論文的通訊作者，是其中4名學生的博士指導教師。在本項目中，通過將iPS、鋅指核酸酶（ZFN）介導的基因打靶技術(shù)、2A序列介導的多基因協(xié)同表達技術(shù)應用于豬的基因組修飾，解決了大動物基因打靶效率低以及多基因協(xié)同表達的技術(shù)瓶頸，并獲得了亨廷頓舞蹈癥模型豬和OG2模型。 

　　樊娜娜，第二完成人，職稱：副研究員，工作單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，完成單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，主要貢獻：主要負責本項目的具體實施，在第一項科學發(fā)現(xiàn)中通過將iPS隨機分化，待外源基因表達沉默后再進行核移植，成功獲得了iPS來源克隆豬，證明豬iPS可以通過核移植技術(shù)獲得克隆豬后代，為基于iPS進行基因修飾豬的制作打通了技術(shù)路線，為第1篇代表性論文的第一作者。在第2、3、5項科學發(fā)現(xiàn)中參與克隆豬的制作，為第2、3、5篇代表性論文的作者。 

　　楊化強，第三完成人，職稱：副研究員，工作單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，完成單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，主要貢獻：第2項科學發(fā)現(xiàn)的主要完成人，第2篇代表性論文的第一作者。將ZFN介導的基因打靶技術(shù)應用于豬基因修飾，實現(xiàn)了高效的基因打靶。 

　　顧為望，第四完成人，職稱：教授，工作單位：南方醫(yī)科大學，完成單位：南方醫(yī)科大學，主要貢獻：作為項目合作方，為本項目中科學發(fā)現(xiàn)3“將2A序列介導的多基因協(xié)同表達技術(shù)應用于豬基因組修飾”和科學發(fā)現(xiàn)4、5“人類亨廷頓疾病模型豬制備”和“OG2轉(zhuǎn)基因模型制備”部分提供研究用豬，共同完成了四色熒光豬和OG2轉(zhuǎn)基因模型制備，是代表性論文3的通訊作者，代表性論文4和5的作者。 

　　肖磊，第五完成人，職稱：教授，工作單位：浙江大學，完成單位：浙江大學，主要貢獻：作為項目合方，為本項目中科學發(fā)現(xiàn)1“以iPS為供體細胞進行核移植獲得iPS克隆豬” 提供iPS細胞系，成功獲得了iPS來源克隆豬，是代表性論文1的通訊作者。 

　　杜玉濤，第六完成人，職稱：副教授，工作單位：深圳華大基因研究院，完成單位：深圳華大基因研究院，主要貢獻：作為項目合方，共同完成了本項目中科學發(fā)現(xiàn)1“以iPS為供體細胞進行核移植獲得iPS克隆豬”IPS克隆豬的制作，是代表性論文1的通訊作者。 

　　黃黎珍：第七完成人，職稱：助理研究員，工作單位：華南理工大學，完成單位：南方醫(yī)科大學，主要貢獻：是科學發(fā)現(xiàn)5的主要完成人，完成了OG2轉(zhuǎn)基因模型的制備，是代表性論文5的第一作者。 

　　陳霽君：第八完成人，職稱：未取得，工作單位：浙江大學，完成單位：浙江大學，主要貢獻：是科學發(fā)現(xiàn)1中豬IPS細胞系的誘導者，是代表性論文1的第一作者。 

　　商周春：第九完成人，職稱：助理研究員，工作單位：深圳華大基因研究院，完成單位：深圳華大基因研究院，主要貢獻：是科學發(fā)現(xiàn)1中豬IPS克隆豬的制作者，是代表性論文1的第一作者。 

　　楊東山，第十完成人，職稱：副研究員，工作單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，完成單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，主要貢獻：科學發(fā)現(xiàn)2“ZFN介導的基因打靶技術(shù)應用于豬基因組修飾研究”和科學發(fā)現(xiàn)4“人類亨廷頓疾病模型豬的制備”主要完成人。是代表性論文2和4的第一作者。 

　　趙本田，第十一完成人，職稱：助理研究員，工作單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，完成單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，主要貢獻：是項目5項科學發(fā)現(xiàn)中ZFN打靶豬、2A序列介導的四色熒光豬、ips克隆豬、人類亨廷頓疾病模型豬、 OG2轉(zhuǎn)基因模型豬，所有以上模型豬的核移植胚胎制作者。是5篇代表性論文的作者。 

　　歐陽振，第十二完成人，職稱：助理研究員，工作單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，完成單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，主要貢獻：是項目5項科學發(fā)現(xiàn)中ZFN打靶豬、2A序列介導的四色熒光豬、ips克隆豬、人類亨廷頓疾病模型豬、OG2轉(zhuǎn)基因模型豬，所有以上模型豬的核移植胚胎制作者。是5篇代表性論文的作者。 

　　劉朝明，第十三完成人，職稱：助理研究員，工作單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，完成單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，主要貢獻：是項目中科學發(fā)現(xiàn)1、2、3、4中ZFN打靶豬、2A序列介導的四色熒光豬、iPS克隆豬、人類亨廷頓疾病模型豬，所有這些模型豬的胚胎移植者，是代表性論文1、2、3、4的作者。 

　　趙宇，第十四完成人，職稱：助理研究員，工作單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，完成單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，主要貢獻：是科學發(fā)現(xiàn)1、2、3中ZFN打靶豬、2A序列介導的四色熒光豬、iPS克隆豬，所有這些模型豬的胚胎移植者， 并負責出生克隆豬的防疫護理，是代表性論文1、2、3的作者。 

　　鄧為，第十五完成人，職稱：副研究員，工作單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，完成單位：中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，主要貢獻：是科學發(fā)現(xiàn)3“將2A序列介導的多基因協(xié)同表達技術(shù)應用于豬基因組修飾”研究的主要完成者，是代表性論文3的作者。 

　　項目簡介：  

　　本項目屬于生命科學生物學中的動物模型研究領(lǐng)域，為基礎(chǔ)研究項目。自2007年起，本團隊聚焦大動物基因修飾技術(shù)研究及基因修飾動物模型的建立工作。在國際上取得了多項技術(shù)突破，并在此基礎(chǔ)上獲得了亨廷頓疾病模型豬和OG2轉(zhuǎn)基因模型。 

　　項目主要內(nèi)容如下： 

　　1、首次獲得了iPS 克隆豬，證明了豬iPS通過核移植途徑獲得后代個體的可行性，為基于iPS 進行基因修飾大動物的制作打通了技術(shù)路線。 

　　2、首次將鋅指核酸酶(zinc finger nuclease, ZFN)介導的基因打靶技術(shù)應用于豬基因修飾，使豬體細胞打靶效率由10-6 提高到4%，并成功獲得了內(nèi)源性基因打靶豬，實現(xiàn)了對大動物高效基因打靶。 

　　3、首次將2A序列介導的多基因轉(zhuǎn)移技術(shù)應用于豬基因組修飾，成功獲得了四色熒光豬，并實現(xiàn)了多個外源基因在動物體內(nèi)的高效協(xié)同表達。 

　　4、成功獲得了人類亨廷頓舞蹈癥的轉(zhuǎn)基因豬模型，并首次在亨廷頓舞蹈癥的動物模型大腦中發(fā)現(xiàn)與人類亨廷頓舞蹈癥患者腦中類似的神經(jīng)細胞凋亡現(xiàn)象。 

　　5、獲得了OG2轉(zhuǎn)基因豬模型，為研究胚胎發(fā)育和追蹤干細胞的多潛能性提供了帶有標記的工具豬模型。

　　以上工作緊密圍繞大動物基因修飾技術(shù)進行研究，解決了缺乏ES 系大動物基因修飾研究中的兩大技術(shù)難題-基因打靶效率低和多基因協(xié)同表達困難，同時，iPS克隆豬的獲得為以iPS替代ES進行基因修飾豬制作打通了技術(shù)路線，并在技術(shù)突破的基礎(chǔ)上成功獲得人類亨廷頓舞蹈癥模型豬和OG2轉(zhuǎn)基因模型。 

　　本項目在Cell Research、Human Molecular Genetics等雜志上發(fā)表論文5篇，其中發(fā)表在Human Molecular Genetics的論文被選為封面文章刊出。論文被SCI數(shù)據(jù)庫論文總引用149次，他引115次，單篇最高引用49次，他引42次。項目在大動物基因修飾技術(shù)方面所取得的突破及所獲得的動物模型將進一步促進基因修飾大動物作為生物醫(yī)藥模型的研究，推動生物醫(yī)藥業(yè)的發(fā)展，具有巨大的社會效益和經(jīng)濟效益。 

　　代表性論文目錄： 

　　1. Piglets cloned from induced pluripotent stem cells. Fan N, Chen J, Shang Z, Dou H, Ji G, Zou Q, Wu L,He L, Wang F, Liu K, Liu N, Han J, Zhou Q, Pan D, Yang D, Zhao B, Ouyang Z, Liu Z, Zhao Y, Lin L,Zhong C, Wang Q, Wang S, Xu Y, Luan J, Liang Y, Yang Z, Li J, Lu C, Vajta G, Li Z, Ouyang H, Wang H,Wang Y, Yang Y, Liu Z, Wei H, Luan Z, Esteban MA, Deng H, Yang H, Pei D, Li N, Pei G, Liu L, Du Y,Xiao L, Lai L. Cell Res. 2013 Jan;23(1):162-6.  

　　2. Generation of PPARγ mono-allelic knockout pigs via zinc-finger nucleases and nuclear transfer 

　　cloning.Yang D, Yang H, Li W, Zhao B, Ouyang Z, Liu Z, Zhao Y, Fan N, Song J, Tian J, Li F, Zhang J,Chang L, Pei D, Chen YE, Lai L.Cell Res. 2011 Jun;21(6):979-82.  

　　3. Use of the 2A peptide for generation of multi-transgenic pigs through a single round of nuclear transfer.Deng W, Yang D, Zhao B, Ouyang Z, Song J, Fan N, Liu Z, Zhao Y, Wu Q, Nashun B, Tang J, Wu Z, GuW, Lai L.PLoS One. 2011;6(5):e19986. 

　　4. Expression of Huntington's disease protein results in apoptotic neurons in the brains of cloned transgenicpigs.Yang D, Wang CE, Zhao B, Li W, Ouyang Z, Liu Z, Yang H, Fan P, O'Neill A, Gu W, Yi H, Li S, LaiL, Li XJ.Hum Mol Genet. 2010 Oct 15;19(20):3983-94.  

　　5. Establishment of a porcine Oct-4 promoter-driven EGFP reporter system for monitoring pluripotency ofporcine stem cells.Huang L, Fan N, Cai J, Yang D, Zhao B, Ouyang Z, Gu W, Lai L.Cell Reprogram. 2011Apr;13(2):93-8.